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分光光度計(jì)的構(gòu)成原理

來(lái)源:愛儀器儀表網(wǎng)  發(fā)布時(shí)間:17-03-07 14:13  作者:ai1718  瀏覽次數(shù):725  分類:技術(shù)文章

分光光度計(jì)是根據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng),以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)我們?cè)谝阎臣兾镔|(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,分光光度計(jì)測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。

產(chǎn)品特點(diǎn)

采用高性能*光柵,波長(zhǎng)精度更高;

采用進(jìn)口鎢燈,發(fā)光效率高,使用壽命長(zhǎng),功耗降低;

超大規(guī)模集成,T/A轉(zhuǎn)換精度高,穩(wěn)定性高;

微機(jī)系統(tǒng)的應(yīng)用,使操作使用簡(jiǎn)單可靠。


儀器構(gòu)成

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。


儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。


光譜范圍

包括波長(zhǎng)范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200~400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.


鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400~760nm波長(zhǎng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍(lán)靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計(jì)的光源.


氫燈(或氘燈)的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185~400 nm波長(zhǎng)的光譜可作為紫外光光度計(jì)的光源.


物質(zhì)的吸收光譜(1)

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長(zhǎng)的光因溶液吸收而消失這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜.


不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).


物質(zhì)的吸收光譜(2)

當(dāng)光線通過(guò)某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過(guò)的光的強(qiáng)度減弱.因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過(guò)溶液.

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過(guò)光


如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:

入射光 = 吸收光 十 透過(guò)光


原理

分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源,通過(guò)系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,光線透過(guò)測(cè)試的樣品后,部分光線被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。


單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(zhǎng)度)成正比,其關(guān)系如下式:

  A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc

  式中 :A 為吸光度;

  I。為入射的單色光強(qiáng)度;

  I 為透射的單色光強(qiáng)度;

  T 為物質(zhì)的透射率;

  k 為摩爾吸收系數(shù);

  L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長(zhǎng)

     c 為物質(zhì)的濃度


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